养殖水体中孔雀石绿残留量检测方法

养殖水体中孔雀石绿残留量怎么检测?目前对于养殖水体中孔雀石绿残留量有对应的检测方法标准依据。百检网就给大家介绍一下养殖水体中孔雀石绿残留量的测定方法相关信息。

检测方法标准依据：DB21/T 2288-2014 养殖水体中孔雀石绿残留量的测定 液相色谱串联质谱法

1 范围

本标准规定了养殖水体中孔雀石绿残留量的测定-液相色谱串联质谱法的原理、试剂、仪器设备、测定步骤、结果计算、检出限、回收率和精密度。

本标准适用于渔业生产养殖水体中孔雀石绿残留量的测定。本方法的检出限为0.05ug/L。

2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

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GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法

3 原理

样品中的孔雀石绿用乙腈和二氯甲烷液液萃取，反相色谱柱分离，质谱检测器检测，内标法定量。

4 试剂

4.1 乙腈：色谱纯。

4.2 二氯甲烷。

4.3 无水乙酸铵。

4.4 甲酸。

4.5 甲酸溶液[1+1000]：准确吸取1.00mL甲酸溶于1000mL水中，经0.22μm混合纤维素滤膜过滤。

4.6 乙酸铵缓冲溶液[5mol/L]：称取0.385g无水乙酸铵溶解于1000mL水中，冰乙酸调pH到4.5。

4.7 乙腈-乙酸铵混合溶液(1+1)：500mL乙腈与500mL乙酸铵溶液(4.6)超声混合5min。

4.8 盐酸 羟胺。

4.9 盐酸 羟胺溶液[0.25g/mL]：称取25g盐酸 羟胺溶于100mL水中。

4.10 对-甲苯磺酸。

4.11 对-甲苯磺酸溶液[1.0mol/L]：称取17.2g对-甲苯磺酸，用水溶解，并定容至100mL。

4.12 标准品：孔雀石绿(MG)、氘代孔雀石绿(D5-MG)，纯度≥98%。

4.13 标准储备溶液。

4.13.1 孔雀石绿标准储备溶液[1.0mg/mL]：准确称取10.0mg的孔雀石绿标准品，用乙腈配制成1.0mg/mL的标准储备溶液，-18℃避光保存，保存期3个月。

4.13.2 氘代孔雀石绿标准储备溶液[1.Omg/mL]：准确称取10.00mg的氘代孔雀石绿标准品，用乙腈配制成1.0mg/mL的标准储备溶液，-18℃避光保存，保存期3个月。

4.14 孔雀石绿标准工作溶液[l00ng/mL、10.0ng/mL]：准确吸取孔雀石绿标准储备溶液(4.13.1)，用乙腈逐级稀释配成100ng/mL和10.0ng/mL的工作溶液，-18℃避光保存，保存期7天。

4.15 氘代孔雀石绿标准工作溶液[l00ng/mL]：准确吸取氘代孔雀石绿标准储备溶液(4.13.2)，用乙腈逐级稀释配成100ng/mL的工作溶液，-18℃避光保存，保存期7天。

注：除非另作说明，本方法所用试剂均为分析纯，试验用水符合GB/T 6682 一级水指标。

5 仪器和设备

5.1 高效液相色谱-串联质谱联用仪。

5.2 电子天平：感量0.01mg。

5.3 旋转蒸发仪。

5.4 旋涡振荡器。

5.5 超声波振荡器。

6 测定步骤

6.1 样品处理

6.1.1 吸取水样50.00mL，置于250mL分液漏斗中。向分液漏斗中加入20.0μL氘代孔雀石绿标准工作溶液(4.15)、1.5mL盐酸 羟胺溶液(4.9)、2.5mL对-甲苯磺酸溶液(4.11)，振摇混匀。

6.1.2 加入10.0mL乙腈、25.0mL二氯甲烷，剧烈振摇3min，静置分层10min，将下层溶液转移至125mL鸡心瓶中。

6.1.3 继续向分液漏斗中加入10.0mL乙腈、25.0mL二氯甲烷，剧烈振摇3min，静置分层10min，合并下层溶液于上述125mL鸡心瓶中，于45℃±2℃水浴中减压浓缩至近干。

6.1.4 向鸡心瓶中加入1.00mL乙腈-乙酸铵混合溶液(4.7)，涡旋振荡lmin、超声振荡lmin，样液经0.22μm针孔式有机相滤膜过滤后供高效液相色谱-串联质谱联用仪测定。

6.2 空白试验

准确量取50.00mL不含孔雀石绿的水样，按样品处理步骤进行。

6.3.1 色谱条件

6.3.1.1 色谱柱：C柱，100mm×3.0mm(内径)，粒度1.8μm。

6.3.1.2 流动相：乙腈十甲酸水溶液(0.1%)=60+40(V/V)。

6.3.1.3 流速：0.25mL/min。

6.3.1.4 柱温：35℃。

6.3.1.5 进样量：10μL。

6.3.2 质谱条件

6.3.2.1 离子源：电喷雾ESI源，正离子模式。

6.3.2.2 扫描方式：多反应监测MRM。

6.3.2.3 雾化气压力：40psi。

6.3.2.4 雾化气温度：350℃。

6.3.2.5 雾化气、干燥气为高纯氮气，气体流量：10L/min。

6.3.2.6 碰撞气为高纯氮气，气体压力：0.15MPa。

6.3.2.7 监测离子对：孔雀石绿m/z 329/313、329/208;氘代孔雀石绿m/z 334/318。

6.4 标准曲线的配制

检测前，吸取孔雀石绿标准工作溶液(4.14)、氘代孔雀石绿标准工作溶液[4.15]适量，用流动相配制成浓度分别为0.01ng/mL、0.05ng/mL、0.10ng/mL、0.50ng/mL、1.00ng/mL、2.00ng/mL、5.00ng/mL的混合标准系列工作溶液，每亳升该溶液含有氘代孔雀石绿2.0ng。将此混合标准系列工作溶液按6.3的仪器条件测定，孔雀石绿以氘代孔雀石绿为内标物，通过仪器工作站制定内标法标准曲线。

6.5 定性依据

在同样测试条件下，阳性样品保留时间与标准物质保留时间相对标准偏差在士5%以内，且检测到的离子的相对丰度，用与强离子(基峰)的强度百分比表示，应当与浓度相当的校正标准相对丰度一致。

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